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答疑｜带你了解肿瘤抗击战的前哨侦察兵----分子检测

来源：病理科编辑：发布时间:2016-11-17 点击量：作者：

  对肿瘤这场漫长的战争中，如果把药物比作是武器弹药，那么引导这些炮弹准确攻击而少误伤正常细胞、监控预后复发等等检测技术就可比作是前哨侦察兵了，或者可以形象地比作是“眼睛”，可见分子检测手段的重要性。不夸张地说，抗癌这场战争将不断受益于分子检测技术的进步。
　　这里，首先需要大家明确的是，没有完美的检测技术，只有针对特定情况和特定目的最合适的检测技术。
  从遗传信息的传递法则来看分子检测技术
  生命科学的中心法则是，DNA用来承载遗传信息，DNA转录成为RNA，RNA再翻译成为蛋白质，我们常见的检测技术，基本上就是检测这三种生物大分子的序列信息、表达水平等。
　　由于RNA非常不稳定，很容易降解，因此目前对RNA进行检测多数在科研阶段，但检测RNA的好处是发现新的融合基因。总之目前主流的检测技术，基因测序是对DNA信息进行测定，免疫组化等是对蛋白质水平进行测定。
　　在上图我们可以看到，虽然DNA转录为RNA，再翻译成蛋白质，但是如果没有DNA水平的扩增，也可能存在蛋白质高表达的情况，具体可能的原因很多。
　　这里只是让大家记住一个结论，如果一个药物是靶向肿瘤细胞的蛋白的，如西妥昔单抗，则最好使用组织样本检测EGFR蛋白水平，而不只是通过DNA水平的EGFR扩增判断是否对药物敏感，DNA水平不扩增，蛋白也可能高表达。
　　什么是免疫组化？
　　免疫组化，是应用免疫学的原理，使用特异性的抗体检测目标组织样本中某一类型蛋白水平的技术，需要注意的是免疫组化检测的只能是组织样本，如果目标蛋白表达量高可以表现出较为深的颗粒性着色。免疫组化技术已经非常成熟，很多蛋白都有特异的抗体。一般对一个肿瘤进行定性，要检测一系列蛋白的表达情况，根据这些来对肿瘤进行定性。

免疫组化检测组织样本中蛋白表达水平

　　免疫组化的结果解读有几种解读标准：
　　如果是3个加号（+）认为是强阳性，
　　一个加号（+）和一个减号（-）一般是阴性，
　　介于二者之间的两个加号（+）认为是弱阳，
　　弱阳性有时需要再次使用FISH进行验证。
　　免疫组化主要检查组织样本的某些蛋白表达水平，主要用于肿瘤的分型。另外也根据一些蛋白表达量，来判断某些靶向药物的疗效。比如检查Her2的表达来指导曲妥珠单抗，检查EGFR表达来指导西妥昔单抗和帕尼单抗的使用、检查MET高表达来看卡博替尼的使用等。
　　什么是原位免疫荧光杂交FSIH？
　　原位免疫荧光杂交用来判断基因的融合，基因的断裂和重排，另外如存在染色体拷贝数增多也是可以使用FISH的，而且目前而言FISH是一个金标准。

原位免疫荧光杂交技术

　　FISH的原理是，使用红绿两种荧光探针，分别标记某个基因的两端，如果一个基因的中间没有发生断裂，则红色荧光和绿色荧光靠近，表现的是一种黄色荧光信号，或者红绿两种荧光靠的很近。
　　如果基因发生了断裂，如ALK与EML4基因融合，ALK基因中间断裂，则分别与ALK基因两端结合的红色荧光探针和绿色荧光探针分开，通过计数出现荧光分离的细胞数目，即可判断是否发生了基因断裂。
　　FISH的检测方法比较成熟，但是操作比较复杂，涉及较多的人工，而且检测一个基因或染色体的重排都在3000元左右。
分子诊断的引入让癌症患者个体化治疗成现实
分子病理经过近几年的发展，在早期筛查、辅助诊断、靶向筛选、化疗预测、预后分析上面起到了至关重要的作用。
早期筛查：
对于最近极为火热的美国影星安吉丽娜•朱莉便是通过基因检测分析，发现BRCA1基因突变，而她母亲正是因为乳腺癌去世，经过评估安吉丽娜•朱莉患乳腺癌的几率为87%，最终选择了预防性的双乳腺切除手术，将乳腺癌罹患风险降至5%。
虽然安吉丽娜•朱莉采取切除来预防比较极端，但是从侧面也反映出，分子诊断能够提早帮助患者发现是否存在癌症易感基因，除乳腺癌的BRCA1、2外，像结直肠癌、胃癌也能通过基因检测提早发现突变基因。据悉，现已有医院将HPV检测、乳腺癌的BRCA1、2基因检测纳入防癌体检范围。
辅助诊断
53岁的李某，腕部长出肿物，虽然形态学考虑恶性间叶源性肿瘤，倾向于滑膜肉瘤，但两个单位免疫组化结果不一致，对是否有上皮分化成分界定不清，经滑膜肉瘤诊断性指标SS18基因断裂检测后确诊为滑膜肉瘤。
对于病理科、肿瘤科，软组织肿瘤、淋巴瘤因分类繁多，形态负责，往往成为诊断的难点，需要多层次、采用多种技术、从不同层面、多个学科的共同解决诊断问题，以进行后续的标准治疗。
靶向药物筛选
靶向药物以其效果明显、毒副反应小，进几年在部分人群中已取得显著疗效。既然是靶向药物，它是针对某一特定靶点即某个基因起作用；既然提及是“部分人群”，也就是这一基因有重要特征的人群，所以需要一个筛选，哪些人需要或可以使用这一类药物。例如，闻名于世的乳腺癌HER2基因检测及肺癌EGFR基因突变检测等。
40岁的王某被诊断为肺癌，临床分期为3A期，2009年手术，EGFR基因突变检测结果为野生型。一年后肿瘤转移，2线标准化疗无效；考虑EGFR基因突变，又予以3线药物特罗凯治疗，仍无效；2012年2月检测发现ALK基因断裂，入组克唑替尼（针对ALK的靶向药物）3期临床试验，治疗2个月后病情部分缓解，8个月后病情终于稳定。可见基于分子检测筛选的靶向药物应用为患者提供了正确的治疗方案，不仅改善了生活质量，同时延长了宝贵生命。
化疗预测，预后判断
化疗的耐药问题及毒性反应都很复杂，如何寻找一个预测化疗敏感指标，以指导临床合理用药，以成为医生们研究的热。此外预后判断是肿瘤肿瘤诊疗过程中的一个重要部分，利用具明确诊断意义的指标为患者提示疾病风险分层，有利于对肿瘤患者疾病转归的掌握，也是对其人文关怀的一部分。（病理科王晓敏）

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